微生(sheng)物限度(du)檢查法的(de)供試(shi)液(ye)制備方法有(you)哪(na)些(xie)

     微生物限度檢查法必須用到供試液，那么如何制備供試液呢？可根據供試品的理化特性與生物學特性，采取適宜的方法制備供試液，常用的供試液制備方法如下：
    一、液體供試品
      取供(gong)試品(pin)10ml，加PH7.0無(wu)菌氯(lv)化鈉-蛋白胨緩沖(chong)液(ye)至100ml，混勻，作(zuo)為(wei)1：10的(de)(de)供(gong)試液(ye)。油劑可加入適量(liang)的(de)(de)無(wu)菌聚山梨酯(zhi)80使供(gong)試品(pin)分散均勻。水溶(rong)性液(ye)體制劑也可用混合的(de)(de)供(gong)試品(pin)原(yuan)液(ye)作(zuo)為(wei)供(gong)試液(ye)。

    二、固體、半固體或黏稠性供試品 
       取供(gong)試(shi)(shi)品10g，加PH7.0無菌(jun)氯化(hua)鈉-蛋(dan)白胨緩沖液至(zhi)100ml，用勻(yun)漿儀或其他(ta)適(shi)宜的(de)(de)方法，混勻(yun)，作為1：10的(de)(de)供(gong)試(shi)(shi)液。必要時加適(shi)量的(de)(de)無菌(jun)聚(ju)山(shan)梨酯80，并置(zhi)水浴(yu)中適(shi)當(dang)加溫使(shi)供(gong)試(shi)(shi)品分(fen)散均勻(yun)。

    三、需用特殊供試液制備方法的供試品
     1、非水溶性供試品
       方法1：取供試品5g(5ml),加入含溶化的（溫度不超過45℃）5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團后，慢慢加入45℃左右的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1:20的供試液。
       方法2：取供試品10g，加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯（制法見附錄XIII B無菌檢查法中供試品的無菌檢查項下）和無菌玻璃珠的適宜容器中 ，必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45℃的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖5~10分鐘，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為1：10的供試液。
     2、膜劑供試品
      取供試品100cm2，剪碎，加50ml或100ml的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（必要時可增加稀釋液），浸泡，振搖，作為1：10或1：20的供試液。
     3、腸溶及結腸溶制劑供試品
      取供試品10g ，加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液(用于腸溶制劑)PH7.6無菌磷酸鹽緩沖液（用于結腸溶制劑）至100ml，置45℃水浴中，振搖，使溶解，作為1：10的供試液。
     4、氣霧劑、噴霧劑供試品
      取規定量供試品，置冰凍室冷凍約1小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液，加至適量的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適量的無菌聚山梨酯80）中，混勻，取相當于10g或10ml的供試品，再稀釋成1：10的供試液。
     5、具抑菌活性的供試品
      當供試品有抑菌活性時，應消除供試液的抑菌活性后，再依法檢查。
     （1）培養基稀釋法：取規定量的供試液，至較大量的培養基中，使單位體積內的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測定細菌、霉菌及酵母菌的菌數時，取同稀釋級的供試液2ml，每1ml供試液可等量分注多個平皿，傾注瓊脂培養基，混勻，凝固，培養，計數。每1ml供試液所注的平皿中生長的菌數之和即為1ml的菌落數，計算每1ml供試液的平均菌落數，按平皿法計數規則報告菌數；控制菌檢查時，可加大增菌培養基的用量。
     （2）離心沉淀集菌法：取一定量的供試液，3000轉/分離心20分鐘（供試液如有沉淀，先以500轉/分離心5分鐘，取全部上清液再離心），棄去上清液，留底部集菌液約2ml，加稀釋液補至原量。
     （3）薄膜過濾法：見細菌、霉菌及酵母菌計數項下的“薄膜過濾法”。
     （4）中(zhong)和法：凡(fan)含汞(gong)、砷或(huo)(huo)(huo)防腐劑(ji)等(deng)具(ju)有抑菌作用的供試品(pin)，可(ke)用適宜的中(zhong)和劑(ji)或(huo)(huo)(huo)滅活劑(ji)消除其抑菌成分。中(zhong)和劑(ji)或(huo)(huo)(huo)滅活劑(ji)可(ke)加(jia)在所用的稀(xi)釋液或(huo)(huo)(huo)培養基中(zhong)。